無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導(dǎo)致細(xì)胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，必須保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)菌無(wú)毒，及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物。
(1)恒定的細(xì)胞生長(zhǎng)溫度：37℃.(維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。)

(2)ph ：7.0-7.4 .(過(guò)酸或過(guò)堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。)

(3)滲透壓 ：細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決定細(xì)胞的膨脹與收縮程度，因?yàn)榧?xì)胞膜是半透膜，只允許對(duì)自己有利的物質(zhì)通過(guò)。同一物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)外的分布的數(shù)量不同，當(dāng)某一種極溶于水的物質(zhì)在細(xì)胞外濃度過(guò)大時(shí)，有可能導(dǎo)致細(xì)胞干癟死亡，這些物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)過(guò)多時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)量吸水膨脹。細(xì)胞膜調(diào)節(jié)滲透壓的能力是有限的。

(4)營(yíng)養(yǎng)物 ：營(yíng)養(yǎng)物和水一起，又叫細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液中含有細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)所需要的各種物質(zhì)。營(yíng)養(yǎng)物包括：n 源、c源，這些物質(zhì)與提供能量有關(guān)；無(wú)機(jī)鹽、維生素、激素，這些物質(zhì)與代謝調(diào)節(jié)控制有關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)液的設(shè)計(jì)一直是細(xì)胞離體培養(yǎng)技術(shù)的關(guān)鍵。理想的細(xì)胞培養(yǎng)液可以同時(shí)解決細(xì)胞離體培養(yǎng)所需要的ph、滲透壓、營(yíng)養(yǎng)物、調(diào)節(jié)物質(zhì)的全部需要。

(5)水 ：需要經(jīng)過(guò)滅菌鍋滅菌才能放入培養(yǎng)箱水槽

(6)無(wú)菌條件 ：與實(shí)驗(yàn)室的硬件設(shè)備和個(gè)人操作有很大關(guān)系。

(7)合適的氣體環(huán)境：氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。動(dòng)物細(xì)胞需要不斷供給氧氣和排除二氧化碳，植物細(xì)胞與此相反。