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毒扁豆堿對乙酰膽堿作用的影響實驗的操作步驟

2018-10-22 16:35 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
毒扁豆堿(Physostigmine),別名依色林、卡拉巴豆堿、依色林,是一種白色、無味,微結晶樣粉末的生物堿化學品?;瘜W名稱1,2,3,3A-六氫-1,3A,8-三甲基吡咯并[2,3-B]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯,分子式為C15H21N3O2 ,分子量為275.34600 ,微溶于水,易溶于乙醇,極易溶于氯仿和二氯甲烷,溶于不揮發性油和苯,熔點102~104℃。毒扁豆堿為抗膽堿酯酶藥,臨床上主要有縮瞳、降低眼壓作用。

本實驗目的是學習研究藥物量效關系的實驗條件。觀察不同濃度乙酰膽堿對離體蟾蜍腹直肌的影響。觀察毒扁豆堿對乙酰膽堿作用的影響以及學習累積劑量效應曲線的繪制方法。

實驗步驟:

1.  連接好實驗裝置,保證實驗條件。
 
2.  記錄裝置的條件:將臺式平衡記錄儀量程旋紐置于 5 mv,打開記錄筆將筆調到記錄 的合適位置。?。?nbsp;g 砝碼懸掛在換能器的小鉤上,調節載波放大器的“增益”、“調零”旋 鈕,使記錄筆上升1大格(25 mm),取下砝碼后,記錄筆又到原位置(加砝碼時調“增益” 旋鈕,取下砝碼時調“調零”旋鈕,需要重復數次即可)。記錄速度 8 mm/min。
 
3.  標本的制備:將蟾蜍破壞大腦與脊髓,背位固定于蛙板上,剪開腹部皮膚,在恥 骨上端以小鑷子分別穿線結扎左右腹直肌的肌腱,于結扎的下方剪斷肌建,沿腹白線向 上剪開(應注意避免剪斷腹壁內側的腹壁靜脈)以分離左右腹直肌,再沿腹直肌外緣向 上剪開,在第二腱劃高度分用線結扎兩側腹直肌,并在結扎線上方剪斷肌肉。標本制成 后,以 Ringer 氏液洗凈,放入置有 Ringer 氏液的燒杯內,備用。
 
本實驗選用蟾蜍腹直肌的理由是因為蟾蜍腹直肌對乙酰膽堿較敏感,藥物作用較緩 和、穩定,易于比較收縮的高度。
 
4.  標本的懸掛:將腹直肌標本一端固定在浴管底部,另一端懸掛于力位移換能制的 小鉤上。腹直肌的張力變化通過力位移換能器、載波放大器后,記錄在臺式平衡記錄儀 上。懸掛好標本后, 立即換液1次,再給腹直肌標本加前負荷 2 g(上升1大格、25 mm 即 可),穩定 30 分鐘,即可加藥。
 
5.  給藥方法:按累積給藥法,先觀察各濃度乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效關系, 給藥順序見表 4-8。然后沖洗,先沖洗4-5次,再每隔 10 分鐘換液1次,待腹直肌標 本重新恢復至基線(約 40 分鐘)后,加入 10-3 mol/L Physosti gmine(毒扁豆堿)0.1 ml,作用 15 分鐘后,仍按累積給藥法加入各度的乙酰膽堿,觀察毒 扁豆堿對乙酰膽堿量效關系的影響,給藥順序見表 4-9。

 

 
6.  繪制量效曲線:以乙酰膽堿引起收縮的最大高度為 100%,計算各濃度乙酰膽堿 收縮腹直肌的百分數。計算方法如下:
 

 
繪制量效曲線時,以收縮百分數為縱座標,以乙酰膽堿濃度的負對數為橫座標,繪 制量效曲線(曲線A:乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效曲線;曲線B:毒扁豆堿預處理 后乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效曲線)。

 

 
 
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