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如何正確使用人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒呢?

2018-07-23 9:15 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
如何正確使用人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒呢?那么我們就從人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒的性能、樣本處理及要求、操作步驟、注意事項等詳細的了解一下吧!

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內與批見應分別小于9%11%

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒試劑盒檢測范圍:

0.2IU/L - 6IU/L

 

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒樣本處理及要求:


1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。


2 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。


3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。


4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。


5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?span lang="EN-US">2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.


7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒試劑盒操作步驟:
1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1800ng/L1200ng/L600ng/L300ng/L 150ng/L)。


2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。


3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。


4. 配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。


5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。


6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。


7. 溫育:操作同3


8. 洗滌:操作同5


9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘


10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。


11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA試劑盒試劑盒注意事項:

 

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。


2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。


3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。


4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。


5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。


6. 底物請避光保存。


7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.


8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。


9. 本試劑不同批號組分不得混用。


10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

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