本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

樣品收集、處理及保存方法
1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品
1.    酶標(biāo)儀（450nm）
2.    高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.    37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)
1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。
2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
4.  嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成
名稱    96孔配置    48孔配置    備注
微孔酶標(biāo)板    12孔×8條    12孔×4條    無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品    0.3mL*6管    0.3mL*6管    無(wú)
樣本稀釋液    6mL    3mL    無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP    10mL    5mL    無(wú)
20×洗滌緩沖液    25mL    15mL    按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋
底物A    6mL    3mL    無(wú)
底物B    6mL    3mL    無(wú)
終止液    6mL    3mL    無(wú)
封板膜    2張    2張    無(wú)
說(shuō)明書    1份    1份    無(wú)
自封袋    1個(gè)    1個(gè)    無(wú)
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、2、4、8、16、32 μmol/L

試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法
1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
 
試劑盒性能
1.  準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2.  靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于1.0 μmol/L。
3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.  重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.  有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明
1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.   嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。