產品名稱	小鼠胚胎干細胞E14
種屬	小鼠
規格	1×10?cells/T25培養瓶
規格	DMEM培養基；15%胎牛血清；1%谷氨酰胺；1%非必需氨基酸；1%丙酮酸鈉 ；0.5 mL β-巰基乙醇 ；5g LIF ；1%雙抗
生長狀態	貼壁生長
運輸溫度	常溫
備注	復蘇細胞包郵/凍存100-400元干冰費

 

僅限于科學研究，不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

 

T25 細胞到貨處理

 

觀察：

1、收到細胞后，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養 瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理：

1 、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。

2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前 三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。

3、不要打開培養瓶蓋，將細胞放入 37 度培養箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩定細胞狀 態。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態，并按常規貼壁或懸浮細胞 的傳代方法操作。

 

貼壁：未超過 80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留 5ml 完全培養基， 放入 37℃、5%CO2 孵箱培養；超過 80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞 培養步驟。首次傳代，建議 1:2 傳代（兩個 T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養 基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進行對比培養。）

 

特殊細胞注意事項：個別細胞貼壁不牢，在運輸過程中發生細胞脫落，這是正常現象。  請將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養使用）， 沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養基終止反應。再 離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充 新的完全培養基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

 

（注意：如收到密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養時要將培養瓶蓋子擰松）

 

 

凍存細胞到貨處理

1 、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發等 問題，請即時聯系。

2 、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3 、復蘇第一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇第 二管。特別說明：未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。

 

細胞復蘇

1 、 從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2 、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3 、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養基重懸，接種 T25 培養瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養箱中 培養；

4 、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

 

細胞傳代

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次： 2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后 加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管 中，1000rpm 離心 5min；

3 、棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25）， 補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養；

 

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次； 2 、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后 加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管 中，1000rpm 離心 5min；

3 、 棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的 無血清凍存液 ，混勻后加入凍存管中。 （如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4 、 將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱 存放 24 小時以上。