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產品名稱:

維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)

 
產品編號: R31918 
維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)
產品名稱:維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)
規格:50T
分類:生化檢測
儲存條件: 4℃,避光,6個月
用途:定量檢測血清、血漿、動植物組織等樣品中的維生素B1(硫胺素)含量。
注意事項:維生素B1(硫胺素)在堿性溶液中,被氧化成藍色熒光化合物硫色素,在紫外線下能發出熒光。激光波365nm發射光波435nm檢測熒光。

產品簡介:
維生素B1(VitaminB1)又稱硫胺素,屬于水溶性維生素,在有氧化劑存在時容易被氧化產生脫氫硫胺素,后者在有紫外光照射時呈現藍色熒光。
維生素B1檢測試劑盒(熒光光度法)是利用VitaminB1水溶液在堿性鹽溶液中能被氧化成藍色的硫色素(一種熒光化合物),在紫外線下硫色素發出熒光,在激發波長365nm,發射波長435nm,在沒有其他熒光物質干擾時熒光強度與硫色素的濃度呈正比,可定量檢測維生素B1的含量,如果樣品中存在干擾物質,可用沸石吸附VitaminB1,以便去除待測樣品中干擾熒光測定的雜質。該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料:
1、蒸餾水
2、pH計
3、離心管或試管
4、正丁醇
5、熒光光度計

操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液:按組織勻漿液(10×):蒸餾水=1:9的比例稀釋,獲得1×組織勻漿液。
2、稀釋標準品:取適量的VitaminB1標準(100μg/ml),按VitaminB2標準(100μg/ml):蒸餾水=1:99稀釋成VitaminB1標準(1μg/ml),4℃避光保存。
3、制備亞硫酸鹽工作液:取一支試劑(I)-亞硫酸鹽100mg粉末,充分溶解于0.5ml蒸餾水中配制成200mg/ml的亞硫酸鹽工作液,即配即用。
4、(選做)制備樣品:取待測材料如麥麩等,準確稱量2~5g,加入研磨器內,加入少量1×組織勻漿液,研磨碎,再次用1×組織勻漿液研磨,最后一并倒入50ml離心管,補充1×組織勻漿液至25ml,充分混勻,沸水中孵育30min,冷卻至室溫,用樣品校正液調節pH至4.5,3500g離心10min,取上清加入2g沸石,振搖30min,棄液,蒸餾水清洗沸石2次,棄洗液,加入2.5ml樣品洗脫液攪拌沸石,洗脫2~3次,將洗脫液合
5、VitaminB1氧化:按下表操作,注意避光操作。

加入物(ml)

空白管

測定管

標準空白管

標準管

VitaminB1標準(1μg/ml)

-

-

2.5

2.5

樣品凈化液

2.5

2.5

-

-

VitaminB1氧化液

1.5

0.9

1.5

0.9

VitaminB1檢測液

-

0.6

-

0.6

振搖15s

正丁醇

5

5

5

5

劇烈振搖90s,靜置分層,吸取下層溶液丟棄;上層溶液加入1.5g硫酸鹽

混勻使脫水。



















 


6、VitaminB1檢測:選用恰當的濾色片,測定的激發波長為365nm,發射波長為435nm,提前預熱儀器30min,分別檢測測定管和標準管的熒光值,同時向空白管和標準空白管的剩余液中加入0.05ml亞硫酸鹽工作液,立即混勻,在20~30s內測出各管的熒光值,作為各自的空白值。

計算:
VitaminB1含量(mg/100g)=(A測定-A空白)×S×N×100/{(A標準-A標準空白)×m×1000}
式中:A測定=測定管的熒光值
A空白=空白管的熒光值
S=標準管中VitaminB1含量(μg)
N=稀釋倍數
A標準=標準管的熒光值
A標準空白=標準空白管的熒光值
m=樣品的質量(g)
注意事項:
1、在上述操作中,要嚴格避免VitaminB1受到陽光直射。
2、待測樣品如不能及時測定,應置于2~8℃保存,3天內穩定。
3、如果樣品濃度過高,應用蒸餾水稀釋后重測,結果乘以稀釋倍數。

并,并用樣品洗脫液定容至10ml,即為樣品凈化液。
VitaminB1氧化:按下表操作,注意避光操作。
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