【PEG1450溶液(50%,無菌)】操作步驟_注意事項_簡介信息

【信息說明】

產品名稱：PEG1450溶液(50%,無菌)

供應商：遠慕生化試劑廠家

規格：10ml 5×10ml

分類：細胞培養

儲存條件：4℃,6個月

用途：聚乙二醇可用作融合劑，以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導細胞雜交，同SigmaP7181。

注意事項：無菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或稱聚乙烯醇1450組成,經過濾除菌。

【操作步驟】

1、 如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細胞:將雜交前體細胞以相同數量(5×104/ml)接種，以適當的培養基培養細胞,待細胞貼壁擴展至匯合成片(80%匯合率)的密度；吸干培養液，加入 PEG1450溶液(50%,無菌)，輕輕轉動1min使PEG1450溶液覆蓋所有細胞。

3、靜置1min：加入完全MEM培養液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液，再用5ml MEM培養液洗滌被PEG處理的細胞；吸干凈洗液，加入 MEM培養液，37℃，5%CO2培養過夜。24~48h后先吸去培養液，加入胰酶消化液處理細胞，待細胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT選擇培養剔除HPRT和TK缺陷細胞。

4、棄上清液：用補加1×HT和1×A的完全培養液重新懸浮細胞；融合后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內發生死亡，對于大多數融合前體細胞而言，可見雜交細胞克隆。

5、懸浮細胞：將兩種不同親體的細胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸?。辉陔x心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,無菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃預熱的含10%胎牛血清的MEM培養液，使PEG1450稀釋并停止作用。

6、離心：棄上清液,加入5ml完全MEM培養液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液；用5ml無血清MEM培養液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min，棄上清液,重復1次該步驟。

7、加入含有胎牛血清的HAT選擇培養基，混勻；將細胞懸液用培養液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板，37℃ 5%CO2孵育過夜24~48h后選出融合細胞。

【注意事項】

1、 應注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、 體外培養的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。

4、 如需HAT選擇系列產品，可選擇Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【簡介說明】

PEG1450溶液(50%,無菌)主要由PEG1450(CAS號25322-68-3)、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類細胞的膜結構，使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發生疏散和重組，兩細胞接口處在雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細胞發生融合。
PEG1450溶液(50%,無菌)可用作融合劑，以獲得生產單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導細胞雜交，僅用于科研領域，不用于臨床診斷或治療。

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標簽：PEG1450溶液(50%,無菌)        PEG1450溶液

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