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蛋白定量不用愁,遠(yuǎn)慕生物解你愁!

2020-04-21 11:04 作者:洛辰 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
質(zhì)譜技術(shù)(Mass Spectrometry,MS)具有靈敏度、準(zhǔn)確度、自動化程度高的特點,能準(zhǔn)確測量肽和蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量、氨基酸序列及翻譯后修飾,開啟了大規(guī)模自動化的蛋白質(zhì)鑒定之門。而以質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的定量蛋白質(zhì),是當(dāng)前研究重大疾病致病機理及藥理控制機制的必要手段。目前,定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)主要包括以質(zhì)譜檢測為核心的穩(wěn)定同位素化學(xué)標(biāo)記(iChemistry?方案)、體內(nèi)代謝標(biāo)記(SILAC技術(shù))和AQUA多肽技術(shù),遠(yuǎn)慕生物不斷完善解決方案,旨在幫助客戶解決定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究的難題。

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)iTRAQ試劑 — 同時分析8種樣品

多樣品同時分析使得劑量分析、時間水平上的動態(tài)監(jiān)測、生物標(biāo)志物研究和目標(biāo)蛋白質(zhì)的絕對定量等重要研究成為可能。iTRAQ技術(shù)作為一種新穎且方便的蛋白質(zhì)組學(xué)定量研究技術(shù),已經(jīng)在疾病標(biāo)志物的尋找和不同時段或者不同狀態(tài)的多樣本定量分析等蛋白質(zhì)組學(xué)研究領(lǐng)域得到了很好的應(yīng)用。

iTRAQ試劑盒包括4種(114、115、116和117)或八種(113、114、115、116、117、118、119和121)相同質(zhì)量的胺活性試劑,能對蛋白質(zhì)水解的肽段進行標(biāo)記,然后用質(zhì)譜技術(shù)對這些多肽進行定量分析。這種簡單的基于肽段的iTRAQ?工作流程突破了很多局限性,可應(yīng)用于蛋白質(zhì)定量方面的全面研究,包括蛋白質(zhì)翻譯后修飾的定量、親和純化樣品所得蛋白質(zhì)和膜蛋白的定性定量。
 

技術(shù)特點:

    1、實現(xiàn)對多組樣品的同時定性和定量分析
    2、使蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)組分析的覆蓋度最大化
    3、增加了數(shù)據(jù)的可靠性和相關(guān)性:可對多達8個樣品同時進行定量分析

高標(biāo)記率SILAC技術(shù) — 體內(nèi)氨基酸代謝標(biāo)記

SILAC技術(shù)利用標(biāo)記的氨基酸在細(xì)胞培養(yǎng)過程中對蛋白進行標(biāo)記,常用于比較蛋白質(zhì)組學(xué)、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)與DNA相互作用、蛋白質(zhì)與RNA相互作用等領(lǐng)域。Sigma-Aldrich公司提供99%豐度的標(biāo)記氨基酸和不完全培養(yǎng)基,可達到最大化標(biāo)記和替代,提高整體的量化精度。

SILAC技術(shù)原理十分簡單:兩組細(xì)胞同時培養(yǎng),A組添加的是正常的“輕型”氨基酸,B組含有穩(wěn)定同位素標(biāo)記的“重型”氨基酸,細(xì)胞傳達若干代后,穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸完全摻入到蛋白質(zhì)中,取代了原有的氨基酸。將兩組細(xì)胞混合后提取蛋白,通過質(zhì)譜鑒定可出現(xiàn)兩段峰值,低分子量的肽段含輕型氨基酸,來源于A組,高分子量的肽段含重型氨基酸,來源于B組。如果SILAC肽段對呈現(xiàn)1:1的比例,則兩組樣品中此蛋白的豐度無異,反之則有差異。
技術(shù)特點:

    1、體內(nèi)標(biāo)記,樣品處理等帶來的定量偏差較小,結(jié)果更精確
    2、標(biāo)記效率高,且不同蛋白的標(biāo)記效率沒有差異
    3、靈敏度高,蛋白質(zhì)需要量少
    4、高通量,可同時鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì)
    5、線性定量范圍廣

合成AQUA多肽 — 生物標(biāo)記物定量的終極方法

AQUA多肽技術(shù)將同位素標(biāo)記的多肽分子作為內(nèi)標(biāo),利用質(zhì)譜技術(shù)更精確地進行生物標(biāo)志物定量、特異氨基酸修飾分析等。AQUATM肽段都經(jīng)過嚴(yán)格的測試,保證其達到高純(HPLC)、精確原子量(ESI-MS)及其多肽特異性,以滿足對蛋白標(biāo)記物進行精確高效的質(zhì)譜定量。

AQUA肽段是根據(jù)目標(biāo)多肽合成的胰蛋白酶肽,每個AQUA肽包含一個穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸,分子量增加6-10道爾頓,與內(nèi)源肽混合后通過質(zhì)譜分析,已知含量的AQUA肽作為內(nèi)標(biāo)可以對內(nèi)源肽進行精確定量。
技術(shù)特點:

    1、更專注于重要蛋白標(biāo)記物的分析
    2、準(zhǔn)確定量低豐度蛋白,測定位點特異性的磷酸化等修飾
    3、技術(shù)流程簡單易操作,無需昂貴、耗時的同位素標(biāo)記過程
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