細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)備及實(shí)驗(yàn)技巧
2016-12-26 15:21 作者：洛辰 來(lái)源：上海遠(yuǎn)慕生物試劑
細(xì)胞培養(yǎng)常用設(shè)備及實(shí)驗(yàn)技巧
常用設(shè)備
準(zhǔn)備室的設(shè)備：
單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲(chǔ)品柜(放置未消毒物品)、儲(chǔ)品規(guī)(放置消毒過(guò)的物品)、包裝臺(tái)。
配液室的設(shè)備：
扭力天平和電子天平(稱(chēng)量藥品)、PH計(jì)(測(cè)量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。
培養(yǎng)室的設(shè)備：
液氮罐、儲(chǔ)品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(tái)(書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)記錄)。必須放在無(wú)菌間的設(shè)備：離心機(jī)(收集細(xì)胞)、超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機(jī)、4℃冰箱(放置serum和培養(yǎng)用液)。
無(wú)菌操作
無(wú)菌室的滅菌：
1.定期打掃無(wú)菌室：每周打掃一次，先用自來(lái)水拖地、擦桌子、超凈工作臺(tái)等，然后用3‰來(lái)蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過(guò)氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%過(guò)氧乙酸，再用紫外燈照射
3.實(shí)驗(yàn)前滅菌：打開(kāi)紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
4.實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺(tái)、邊臺(tái)、倒置顯微鏡的載物臺(tái)。
實(shí)驗(yàn)人員的無(wú)菌準(zhǔn)備：
1.肥皂洗手。
2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦凈雙手。
無(wú)菌操作的演示：
1.凡是帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精燈火焰操作。
3.器皿使用前必須過(guò)火滅菌
4.繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處，使用時(shí)仍要過(guò)火。
5.各種操作要靠近酒精燈，動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
1.自來(lái)水刷洗，除去灰塵。
2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小時(shí)后立即用自來(lái)水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來(lái)水沖干凈后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清潔液(重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml)浸泡12小時(shí)，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來(lái)水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過(guò)3次。
5.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙(油光紙)包裝。
6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開(kāi)開(kāi)關(guān)和安全閥，當(dāng)蒸氣成直線(xiàn)上升時(shí)，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，維持20-30分鐘。
7.高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
1.刷洗、烘干：使用過(guò)的玻璃器皿可直接泡入來(lái)蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過(guò)來(lái)蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液(酸液)，12小時(shí)后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來(lái)水沖洗(避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗)，再用蒸餾水沖洗3次。
3.烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝，以便于消毒儲(chǔ)存及防止灰塵和再次被污染。
4.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)，蓋好蓋子，打開(kāi)開(kāi)關(guān)和安全閥，隨著溫度的上升安全閥冒出蒸氣，當(dāng)蒸氣成直線(xiàn)冒出3-5分鐘后，關(guān)閉安全閥，氣壓表指數(shù)隨之上升，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，調(diào)節(jié)電開(kāi)關(guān)維持20-30分鐘即可。(玻璃培養(yǎng)瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上)
5.烘干備用：因?yàn)楦邏合竞笃髅髸?huì)被蒸氣打濕，所以要放入烤箱內(nèi)烘干備用。
金屬器械洗消：
金屬器皿不能泡酸，洗消時(shí)可先用洗滌劑刷洗，后用自來(lái)水沖干凈，然后用75%酒精擦拭，再用自來(lái)水，然后用蒸餾水沖洗，再烘干或空氣中晾干。放入鋁制盒內(nèi)包裝好在高壓鍋內(nèi)15磅高壓(30分鐘)消毒，再烘干備用。
橡膠和塑料：
橡膠和制品通常處理方法是：先用洗滌劑洗刷干凈，再分別用自來(lái)水和蒸餾水沖干凈，再用烤箱烘干，然后根據(jù)不同品質(zhì)進(jìn)行如下的處理程序：
1.針式濾器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小時(shí),或者煮沸20分鐘,在包裝之前要裝好濾膜兩張，安裝濾膜時(shí)注意光面朝上(凹向上)，然后將螺旋稍微擰松一些，放入鋁盒中在高壓鍋內(nèi)15磅30分鐘消毒，再烘干備用。注意在超凈臺(tái)內(nèi)取出使用時(shí)應(yīng)該立即將螺旋旋緊。
2.膠塞烘干后用2%氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘(用過(guò)的膠塞只要用沸水處理30分鐘)，自來(lái)水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來(lái)水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。
3.膠帽，離心管帽烘干后只能在2%氫氧化鈉溶液中浸泡6-12小時(shí)(切記時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng))，自來(lái)水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來(lái)水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。
4.膠頭可用75%酒精浸泡5分鐘，然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，凍存管：
6.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸氣消毒，可用70%酒精浸泡消毒。塑料培養(yǎng)皿打開(kāi)蓋子，放在超凈臺(tái)臺(tái)面上，直接暴露在紫外線(xiàn)下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2—3周時(shí)間洗除殘留的氧化乙烯。用20000—100000rad的r射線(xiàn)消毒塑料制品效果。
為了防止清洗器材已消毒與末消毒發(fā)生混淆，可在紙包裝后，用密寫(xiě)墨水作好標(biāo)記。其法即用沾水筆或毛筆沾以密寫(xiě)墨水，在包裝紙上作一記號(hào)，平時(shí)這種墨水不帶痕跡，一經(jīng)高溫，即出現(xiàn)字跡，從而可以判定它們是否消毒。密寫(xiě)墨水的配制：氯化鉆(CoC12?6H2o)2g，30%鹽酸10m1，蒸餾水88m1。
注意事項(xiàng)：
1.嚴(yán)格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：高壓消毒時(shí)，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸餾水，以防高壓時(shí)燒干，水不能過(guò)多因?yàn)槠鋵⑹箍諝饬鲿呈茏瑁瑫?huì)降低高壓消毒效果。檢查安全閥是否通暢，以防高壓時(shí)爆炸。
2.安裝濾膜時(shí)注意光面朝上：注意濾膜光滑一面是正面，要朝上，否則起不到過(guò)濾的作用。
3.注意人體的防護(hù)和器皿的完全浸泡：A.泡酸時(shí)要戴耐酸手套，防止酸液濺起傷害人體。B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時(shí)防止酸液濺到地面，會(huì)腐蝕地面。C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有氣泡，以防止泡酸不徹底。
![雙[三(羥甲基)氨基甲烷],CAS:6976-37-0](http://struc.chem960.com/strucimg/7000/ctzw0nzi34oyob9fnlmhiwee.png)
