細胞培養(yǎng)實驗使用血清應(yīng)注意的問題：

    1）血清第一次使用前，是否應(yīng)在56oC，30分鐘加熱血清以滅活補體系統(tǒng)？

    激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養(yǎng)ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞生長只有微小的促進或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量，而造成細胞生長速率降低。而經(jīng)過熱處理的血清沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。而把血清放在37℃環(huán)境中又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間，更確保血清的質(zhì)量。

    2）通常使用的血清的種類：

    新生牛血清：新出生牛5天內(nèi)取血制成。小牛血清：小牛出生16周以內(nèi)采血制成。胎牛血清：（進口血清）要求剖腹取胎制成。國內(nèi)廠家往往不能做到，經(jīng)常把出生2天以內(nèi)采血稱為胎牛血清。根據(jù)血清的生產(chǎn)工藝及血紅蛋白、內(nèi)毒素含量又分為：（1）特級胎牛血清：40納米過濾，內(nèi)毒素含量≤10EU，血紅蛋白含量≤10mg/dl。（2）優(yōu)等胎牛血清：經(jīng)過3次100納米過濾，內(nèi)毒素含量≤25EU/ml，血紅蛋白含量≤25mg/ml。（3）標準胎牛血清：3次100納米過濾，低內(nèi)毒素，低血紅蛋白含量。

    3）為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?

    有些胎牛血清產(chǎn)品沒有預(yù)老化，儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白，如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。建議在-20℃儲存胎牛血清，避免反復凍融。

    4）血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)：

    血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成。而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后也會存在于血清中，也是造成沉淀物的原因之一。但這些絮狀沉淀物并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。最好不使用過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。

    5）如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

    我們建議您在使用血清的時候，注意下列的操作:(1)解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃過夜，37oC水浴解凍)。若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，非常容易產(chǎn)生沉淀物。(2)解凍血清時要隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。(3)請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。(4)如果在高于40oC的水浴中融化并且不時常搖晃混勻，非常容易造成沉淀物增多。同樣血清的熱滅活也造成沉淀增多，若非必要，可以省去熱滅活。(5)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。