實驗原理
    試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中sPECAM-1/sCD31表達。用純化的sPECAM-1/sCD31抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中sPECAM-1/sCD31相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的sPECAM-1/sCD31抗體結合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中sPECAM-1/sCD31的存在與否。

    樣本要求：
    1．sPECAM-1/sCD31人可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1酶聯(lián)免疫試劑盒標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應避免反復凍融
    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

    操作步驟：
    1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
    2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50%l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40%l，然后再加待測樣品10%l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
    3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
    4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
    6.加酶：每孔加入酶標試劑50%l，空白孔除外。
    7.溫育：操作同3。
    8.洗滌：操作同5。
    9.顯色：每孔先加入顯色劑A50%l，再加入顯色劑B50%l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
    10.終止：每孔加終止液50%l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
    11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

    試劑盒注意事項：
    1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
    2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
    3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
    4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
    5．底物請避光保存。
    6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm
    7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

    保存條件及有效期：
    1．試劑盒保存：2-8℃。
    2．有效期：6個月